什么是艾滋病核酸检测？

什么是艾滋病核酸检测？在这次新冠肺炎疫情中，核酸检测可谓是功不可没。那么关于艾滋病的核酸检测你是否了解呢？由国家卫生健康委员会发布，2019年7月1日开始实施的《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》WS-293-2019，将核酸检测纳入艾滋病诊断标准。由中国疾病预防控制中心艾防中心组织专家修订的《全国艾滋病检测技术规范（2020年版）》中也强化了核酸检测的诊断价值。今天我们一起来认识一下艾滋病的核酸检测吧！

什么是艾滋病核酸检测？艾滋病核酸检测，直击艾滋病病毒的RNA或DNA结构，检测血液中是否存在病毒核酸，诊断有无病原体感染。采用PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂和自行研究开发设计的复合引物，覆盖常见的HIV毒株，具有很高的灵敏度。使用二次扩增的套式PCR扩增方法，提高检测的特异性，降低假阳性的概率。

核酸检测将艾滋病病毒的检测窗口期缩短至11天，并且核酸检测这项技术可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。

艾滋病基因结构

艾滋病基因组由两条单链RNA组成，每个RNA基因组约为9.7k，在RNA5′端有一帽结构（m7G5ppp5′GmpNp），3′端有poly（A）尾巴。艾滋病的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同，均由5′末端长重复（long terminal repeat，LTR）、结构蛋白编码区（gag）、蛋白酶编码区（pro）、具有多种酶活性的蛋白编码区（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的长重复LTR区组成。

 

核酸的提取方法

核酸提取均采用磁珠法。

1）磁珠提取的原理：

将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。

2）步骤：

裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱

3）优点：

a.磁珠提取特异性高，受标本因素影响小，灵敏度高

b.易于实现自动化

4)缺点：

a.成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。

b.完全手工工作，工作量太大。

应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术

根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增，其产物再经内侧引物扩增，直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100～1000倍，可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。

根据专业文献记载，用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性，而61名健康人和可疑者均为阴性，后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。

由此可知，nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用，而且有着更广阔的应用前景。

艾滋病核酸检测的优点

人体感染艾滋病病毒后，一般需要2-12周，平均42天左右血液中才可检测到HIV抗体。在这段时期内，常规检测技术根本无法检测出HIV病毒，这就是常说的“HIV窗口期”。“窗口期”的存在，也解释了为什么一些病人在接受了正规医院输血后却感染艾滋病的原因。

在感染过程中，首先出现的是病毒RNA，这时可以用PCR的方法检测出来，之后出现的是IgM抗体，使用双抗原夹心法即可以检测出来，然后出现的是IgG抗体，使用间接法可以检测出来。

省市疾病控制中心和检测试纸，使用的检测方法都是检测抗体抗原，无法避免“HIV窗口期”因素的干扰。所以说，常规检测技术在HIV窗口期内存在重大缺陷。

为什么要进行艾滋病核酸检测？

艾滋病目前没有药物能够完全治愈，以致于认为查不查无所谓。事实上，越早检测，越早治疗更加有利于延缓艾滋病病毒发展，提高自己的身体抵抗力，也可以保护其他人感染艾滋病，前期控制好艾滋病利大于弊。

1、前期的艾滋病窗口期

原来的HIV免疫学检测方法都存在一定的窗口期。艾滋病病毒在进入人体后，机体需要经过一段时间才会产生抗体，在此期间血液抗体检测呈阴性，抗原抗体通常是在感染后3—6周后才能被检测出来，时间上较久，而且在准确度上会大打折扣。在窗口期虽测不到HIV抗体，但体内已有HIV，因此窗口期同样具有传染性。

在血液筛查方面，艾滋病病毒核酸检测无疑可以增加血液的安全性。国家相关法律规定，由窗口期血源引起的感染不属于医疗事故。原来的免疫学检测方法都存在一定的窗口期，这样给血液安全带来很大的威胁。在EIA试剂检测后，美国几种主要经血传播病毒的“窗口期”分别为：HIV 22天，HTLV 51天，HCV 72天，HBV 63天；输血后病毒危险性分别为1:493 000，1:641 000，1:103 000和1:63 000。在美国，艾滋病病毒核酸检测已经常规用于HIV 和HCV筛查。这样做大大降低了输血后感染HIV病毒的残余危险性。

2、尽早检测，及时预防，控制艾滋病

进行HIV病毒核酸检测，能及早发现感染，在HIV病毒入侵两周内，及时注射丙种球蛋白抑制HIV，可以降低被感染的几率。

艾滋病病毒是逆转录病毒，所谓逆转录病毒是它在侵入宿主细胞后，以自己的单链RNA为模板，按照碱基互补配对原则，在逆转录酶的作用下，合成cDNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，随宿主DNA复制、转录、翻译达到扩增目的病毒。丙种球蛋白是逆转录抑制剂，就是阻止HIV逆转录宿主DNA过程的药物。及时发现，尽早治疗，能降低被感染的几率，也能增强机体对HIV 的特异性细胞和体液免疫应答，缩短潜伏感染的半衰期，维持CD4+ 细胞的功能，减缓艾滋病的病程进展。

美国《时代》杂志网站近日发布了“2011年十大医学突破”评选结果。其中有一项即为“艾滋病防治的新进展”。新研究发现，抗逆转录病毒（ARV）药物不仅帮助艾滋病患者抗击HIV，还能让健康人远离艾滋病毒。美国华盛顿大学一项涉及4758名参试者的研究发现，服用该药的健康者HIV感染率降低73%。

3、检测有利于控制自己的心理状态，克服未知的恐惧心理压力。

近年来，随着艾滋病的迅猛发展，有许许多多的人患上了这种艾滋病恐惧症。恐惧，是人类的一种本能的反应，适度的恐惧对人类的生存是有利的，但不必要的、过分的恐惧却是有害的，是一种心理异常。

艾滋病恐惧症就是这样一种心理异常，它包括以下情形：不必要地过分担心自己会得艾滋病，或者毫无根据地怀疑自己感染了艾滋病，患者同时伴有一些情绪异常和行为异常，严重影响其学习、工作、生活及社会交往。

艾滋病核酸检测适用于哪些情况？有什么意义？

艾滋病核酸检测常用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测等。

对于筛查试验有反应但抗体试验不确定或阴性的样本，可将核酸检测、临床病史和 CD4+T 淋巴细胞计数检测结果综合判断。

对于近期有明确流行病学史的个体，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。划重点！核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染哦！

对于HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。

对于献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，减少二代传播。

对于经抗病毒药物治疗后的患者，应定期进行HIV-1病毒载量检测，可帮助判断是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案。

什么是艾滋病核酸检测？核酸检测常用的方法有哪些？

HIV核酸检测主要分为定性和定量试验，均可作为HIV感染诊断试验，不同的方法，艾滋病检测结果判定和报告也是不同的。

HIV-1核酸定性检测

包括RNA检测和DNA检测。检测方法主要有实时荧光定量 PCR方法、荧光探针PCR法及以焦磷酸化激活聚合酶（PAP）反应为基础的核酸扩增PCR方法。

检测结果显示“有反应”或“检测到”，报告核酸阳性；检测结果显示“无反应”或“未检测到”，报告核酸阴性。艾滋病核酸定性检测阴性不能排除HIV-1感染，还需要根据流行病学史、临床表现和实验室其他相关指标进行艾滋病诊断。

HIV-1核酸定量检测

RNA检测主要是定量检测血浆中的病毒RNA，检测的主要原理是实时荧光定量PCR。DNA检测包括全血、干血斑、PBMC及组织中DNA检测，同定性检测一样，DNA含量测定主要有荧光探针PCR法及以焦磷酸化激活聚合酶（PAP）反应为基础的核酸扩增PCR方法。另外近几年迅速发展起来的一种核酸绝对定量分析技术——数字PCR也可用于HIV核酸定量检测，虽然2020修订版的规范中还没有说明，但相信这种技术在艾滋病领域也会很快发展起来。

对于检测结果：当检测值>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值；检测值≤5000 CPs/ml，再次采样检测后报告检测值，结果>5000 CPs/ml可以作为诊断依据，结果仍≤5000 CPs/ml，则需结合流行病学史、临床病史等结果进行综合判断。检测值小于检测下线，报告低于检测限。划重点！对于暴露前或暴露后预防用药的个体，检测值低于最低检测限不能排除HIV-1感染，需要根据其他相关指标进行综合判断。

艾滋病核酸检测应该注意什么？什么是艾滋病核酸检测？

对于专业人员来说，应注意样本采集、送检和保存，HIV核酸检测应在符合要求的实验室中进行，实验人员应充分了解并严格遵守各项规定和掌握操作技能，所用试剂必须是经国家药品监督管理局注册、在有效期内的试剂，并严格按产品说明书操作。同时要做好质量控制，包括从样本接收到发出报告各环节的管理过程，人员、实验室分区和环境、仪器和检测过程等。

对于艾滋病患者或者高危人员来说，可以到疾控中心进行免费的核酸检测，在核酸检测前一天，要注意多休息，补充维生素，避免食用油腻食物和饮酒，放松心情。

艾滋病核酸检测知识

美国CDC在2019年艾滋病诊断大会上发表了HIV核酸定量检测替代策略的报告，提出了“三步法”替代策略和“两步法”替代策略，研究发现两种策略不仅具有良好的检测准确性，还能有效减少检测成本，及时排除筛查假反应性，缩短检测时间，同时能提高HIV-1核酸定量检测结果在临床工作中的使用价值，但这也需要更多的研究数据来证明。总体来说这种新策略对于今后艾滋病检测工作的完善还是具有指导和借鉴意义的！

参考文献

1.《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准 WS-293-2019，中华人民共和国国家卫生健康委员会。

2.《全国艾滋病检测技术规范（2020年版）》，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。

3. CDC reports on two alternative HIV testing algorithms [R]. CAP TODAY. AmyCarpenter Aquino, 2019.